支原體qPCR檢測(cè)不僅用于細(xì)胞培養(yǎng)的支原體篩查，也用于生物制品行業(yè)的放行檢測(cè)，但前提是要有方法驗(yàn)證。

無(wú)論是否遵循藥典，支原體qPCR檢測(cè)的結(jié)果判定都需要一定的標(biāo)準(zhǔn)。下面小編結(jié)合德國(guó)MB廠家的支原體qPCR說(shuō)明書(shū)及相關(guān)文件，給予進(jìn)一步的闡釋。下面小編結(jié)合德國(guó)MB廠家的支原體qPCR說(shuō)明書(shū)及相關(guān)文件，給予進(jìn)一步的闡釋。

一、熒光檢測(cè)通道的結(jié)果詮釋

用MB公司的qPCR試劑盒檢測(cè)時(shí)，qPCR儀的FAM通道檢測(cè)支原體熒光信號(hào)，HEX通道檢測(cè)內(nèi)控對(duì)照（簡(jiǎn)稱IC）的熒光信號(hào)（如沒(méi)有HEX通道，可用VIC通道）。IC是用于監(jiān)測(cè)qPCR反應(yīng)是否正常。對(duì)于這兩個(gè)通道，Ct＜40為陽(yáng)性結(jié)果。Ct≥40為陰性結(jié)果。支原體DNA和IC存在信號(hào)的競(jìng)爭(zhēng)性抑制。

在陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照均結(jié)果正常的前提下，

根據(jù)FAM^TM通道和HEX通道的檢測(cè)結(jié)果，可判別樣品是否有支原體污染。

具體見(jiàn)下表：

表1. FAM™通道 (支原體) 和HEX™ (IC) 通道的結(jié)果詮釋

需要說(shuō)明的是：

內(nèi)控對(duì)照可在支原體DNA抽提時(shí)加入。如果結(jié)果無(wú)效，則說(shuō)明抽提失敗，或者qPCR存在抑制。

如果內(nèi)控對(duì)照是在qPCR反應(yīng)時(shí)加入，則說(shuō)明qPCR存在抑制。

二、對(duì)照與樣品的結(jié)果詮釋（適用于符合EP/JP的檢測(cè)）

對(duì)于遵循EP/JP的檢測(cè)，具體數(shù)據(jù)詮釋見(jiàn)表2。

表2.

表2結(jié)果判定的前提是：qPCR檢測(cè)試劑盒符合EP/JP的要求。

三、MB公司支原體qPCR應(yīng)選擇質(zhì)量較好，符合藥典要求的試劑盒，如德國(guó)MB公司的支原體qPCR檢測(cè)試劑盒(經(jīng)典法)(英文名：Venor®Gem qEP)經(jīng)過(guò)廠家全面的方法驗(yàn)證，符合歐洲藥典/日本藥典要求，

適合細(xì)胞治療，CAR-T，抗體藥、疫苗等臨床項(xiàng)目申報(bào)和質(zhì)檢。

需注意樣本要先做DNA抽提，再進(jìn)行qPCR檢測(cè)。

MB還提供用于PCR/qPCR方法驗(yàn)證的配套的支原體10CFU、100CFU菌株標(biāo)準(zhǔn)品、特異性驗(yàn)證用支原體基因組DNA和細(xì)菌基因組DNA、支原體DNA定量標(biāo)準(zhǔn)品（基因組拷貝數(shù)經(jīng)嚴(yán)格標(biāo)定）。